德國(guó)進(jìn)行的一項(xiàng)研究顯示，長(zhǎng)期接受免疫抑制治療的腎移植患者發(fā)生肝硬化與乙肝病毒(HBV)復(fù)雜變異體的累積有關(guān)，包括表型的顯著改變并伴有復(fù)制增加和蛋白表達(dá)缺陷。這種表型似乎主要與核心啟動(dòng)子和C基因的主要變異有關(guān)，但也受到整個(gè)基因組其他變異的影響。
慢性HBV肝炎患者長(zhǎng)期接受免疫抑制治療(如腎移植后)，可能會(huì)發(fā)生肝硬化和終末期肝病。研究人員發(fā)現(xiàn)這可能與HBV各種復(fù)雜變異體的累積和持續(xù)存在有關(guān)，如C基因和(或)前S區(qū)的缺失以及核心啟動(dòng)子的缺失和插入。為此，研究人員首次對(duì)相關(guān)HBV變異體完整表型進(jìn)行了分析。HBV基因組(基因表型A2)來(lái)自于1例慢性乙肝腎移植接受者的血清和肝臟，包括出現(xiàn)終末期肝病前和之后的標(biāo)本。該患者HBeAg陽(yáng)性并長(zhǎng)期接受免疫抑制治療，在10年的輕度肝炎后出現(xiàn)了終末期肝病。研究者分離并克隆HBV基因組，隨后將HBVDNA轉(zhuǎn)染至肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系HuH7。為彌補(bǔ)復(fù)制能力，所有伴C基因缺失的變異體均與表達(dá)核心抗原的質(zhì)粒pCore共轉(zhuǎn)染。研究者采用了一個(gè)wt基因組作為主要的參照和共轉(zhuǎn)染。通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后HBV復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)等，對(duì)各種變異體(主要是4個(gè)克隆基因組S15、S18、S24和L1)進(jìn)行功能性研究。
結(jié)果顯示，與wt基因組相比，該患者病毒克隆的表型改變非常廣泛。在轉(zhuǎn)錄方面，病毒變異體基因組中前核心(preC)和表面mRNA水平降低，而前基因組RNA(pgRNA)水平增加。pgRNA的主要剪切產(chǎn)物水平明顯降低。在蛋白表達(dá)方面，所有表面蛋白、核心蛋白和HBeAg表達(dá)和(或)分泌明顯減少或缺失。此外，研究者還檢測(cè)到了非常少量的變異核心蛋白并伴有內(nèi)部缺失(30-aaC基因缺失)。表面蛋白表達(dá)和HBsAg分泌的幾乎完全抑制可能與多種因素有關(guān)，包括表面mRNA減少，S2/S啟動(dòng)子頻繁的點(diǎn)突變以及表面蛋白終止密碼子突變等。一些變異體HBsAg分泌減少可能與表面蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的錯(cuò)位有關(guān)。盡管病毒蛋白表達(dá)存在缺陷，與野生型HBV相比，仍然能夠觀察到復(fù)制增強(qiáng)以及富集，這可能與逆轉(zhuǎn)錄增加及pgRNA水平增加有關(guān)。結(jié)合既往研究結(jié)果，研究者認(rèn)為上述功能變化中的幾種至少能部分歸因于Cp和(或)C基因變異，如preCmRNA減少和pgRNA水平增加與Cp變異有關(guān)，HBeAg完全缺失與C基因缺失有關(guān)。但值得注意的是，盡管Cp變異和C基因缺失是一致的，但復(fù)制增強(qiáng)和富集水平在不同變異體間卻顯著不同。因此復(fù)制水平不只是Cp變異和C基因缺失效果的簡(jiǎn)單疊加，其他C基因點(diǎn)突變和Cp及C基因以外的其他變異也影響了復(fù)制水平。研究者認(rèn)為，上述改變可能會(huì)通過(guò)多種途徑導(dǎo)致細(xì)胞毒性或干擾宿主細(xì)胞的正常生理，如通過(guò)表面蛋白滯留，由preS變異體導(dǎo)致的cccDNA堆積，或者是核心抗原堆積等。此外，主要剪切產(chǎn)物RNASP1水平的明顯降低在發(fā)病機(jī)制中可能也發(fā)揮了一定作用，因?yàn)檗D(zhuǎn)錄、mRNA加工、核轉(zhuǎn)運(yùn)和翻譯是功能上相互關(guān)聯(lián)的過(guò)程，病毒剪切模式的改變可能會(huì)影響病毒復(fù)制的各種水平。
