丙肝疫苗的研究現(xiàn)狀:核酸疫苗
核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，并通過宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。由于HCV結(jié)構(gòu)的變異，與傳統(tǒng)蛋白質(zhì)疫苗相比，DNA疫苗明顯優(yōu)于傳統(tǒng)疫苗。DNA疫苗克服了傳統(tǒng)病毒減毒疫苗、滅活疫苗或多肽疫苗所造成的抗原決定簇的改變，保持了完整的免疫原性；DNA疫苗既可誘導(dǎo)體液免疫又可誘導(dǎo)細(xì)胞免疫，而以后者為主要特征；DNA疫苗可在體內(nèi)長期、穩(wěn)定表達(dá)外源蛋白，這為研制和開發(fā)利用多基因型與基因突變率高的病毒性疾病疫苗提供了理論依據(jù)。主要有C區(qū)DNA疫苗、E區(qū)DNA疫苗、C+E區(qū)DNA疫苗、Ns區(qū)DNA疫苗等。
Zhu等研究了以HCV E1、E2基困構(gòu)建的重組質(zhì)粒免疫BALB／c小鼠的免疫效果。結(jié)果表明：3次免疫后，所有小鼠均出現(xiàn)了抗El、E2抗體，抗E1抗體滴度最高達(dá)l：320，而抗F2抗體滴度最高達(dá)1：1280。淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)未見有針對(duì)E1的特異性增殖，而針對(duì)E2的增殖刺激指數(shù)平均為1.4，且免疫后的小鼠IFN-1的分泌也顯著高于對(duì)照組。Lagging等構(gòu)建了C基因（第1-191aa）重組質(zhì)粒pcDNA HCV Core，0.2 mg質(zhì)粒肌肉注射免疫BALB／c小鼠2-3次后，于第6 wk處死小鼠，可檢測(cè)到較高水平的抗C抗體，免疫2次或3次的抗體滴度相似。這些結(jié)果提示HCV C區(qū)將有助于HCV疫苗的研制。以上實(shí)驗(yàn)說明，HCV C區(qū)構(gòu)建的重組質(zhì)粒均能在真核細(xì)胞中表達(dá)，且能誘導(dǎo)出特異性體液免疫和細(xì)胞免疫，加上C區(qū)相對(duì)保守，是研制HCV DNA疫苗的主要靶抗原之一。Rollier等以HCV Ia基因型E2區(qū)不同基因片段構(gòu)建了3種不同重組體，用im或im加iE等不同途徑免疫小鼠，抗體陽性率在60-100％之間?？梢奌CV DNA免疫，im加iE是最有效的方法。Ara等[9]將編碼結(jié)構(gòu)區(qū)（C+E1+E2）基因片段（341-2449nt）克隆入含CMV啟動(dòng)子的PRC載體中，構(gòu)建HCV結(jié)構(gòu)區(qū)DNA疫苗，通過哺乳細(xì)胞體外表達(dá)和免疫小鼠研究證實(shí)，其不僅能在Human293、BALB／c、cosl中表達(dá)C、E1、E2蛋白，而且還能誘導(dǎo)BALB／c小鼠產(chǎn)生抗體和特異性CTL的活性。另有人用HCV C+E2序列構(gòu)建的質(zhì)粒DNA疫苗免疫小鼠能誘導(dǎo)特異性的CTL活性、抗C和抗E2抗體應(yīng)答，和Thl為主的增生有關(guān)。Lang等 [10]一證實(shí)在HCV NS3區(qū)存在一個(gè)CTL表位，其最小單位由10肽組成，推測(cè)其可作為HCV DNA疫苗構(gòu)建的有效。
與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)疫苗相比，DNA疫苗有可激發(fā)機(jī)體全面的免疫應(yīng)答、可表達(dá)接近天然構(gòu)象的抗原，抗原性強(qiáng)以及能聯(lián)合免疫等優(yōu)點(diǎn)。但同時(shí)，DNA疫苗仍有許多實(shí)際問題阻礙其發(fā)展。主要體現(xiàn)在：（1）HCV屬RNA病毒，具有高度的變異性；（2）只對(duì)人及黑猩猩易感；（3）難以體外培養(yǎng)；（4）缺乏有效的體外復(fù)制系統(tǒng)等問題，仍需進(jìn)一步研究。
