課題以了解HBV核心基因啟動子突變與肝損害程度或HBeAg狀態(tài)的關(guān)系為研究目的。實(shí)驗(yàn)所用血清采自南寧市各大醫(yī)院住院的59例慢性肝炎患者，其中男47例，女12例，年齡在16～57歲。HBeAg陽性28例、陰性31例。PCR試劑購自美國克隆技術(shù)實(shí)驗(yàn)室，DNA純化試劑購自美國Promega公司，循環(huán)測序試劑盒購自美國USB公司。DNA提取按酚/氯訪/異戊醇(25/24/1)常規(guī)法抽提；DNA擴(kuò)增：做套式PCR，每輪擴(kuò)增反應(yīng)條件相同：熱啟動94℃5分鐘，然后94℃30秒，55℃30秒，72℃1.5分鐘。30個循環(huán)后繼續(xù)循環(huán)：72℃10分鐘，22℃5分鐘；用直接測序法對DNA進(jìn)行序列測定。
套式PCR結(jié)果顯示，59例慢性乙型肝炎患者35例HBVDNA陽性，陽性率為59.3%。16例HBeAg陽性患者HBVDNA陽性，陽性率57.1%(16/28),19例HBeAg陰性患者HBVDNA陽性，陽性率61.3%(19/31)。BCP序列測定結(jié)果顯示，無正常序列標(biāo)本，最常見的突變類型是nt1762、1764發(fā)生雙突(A→T、G→A)，占57.1%(20/35）；其次的突變類型有nt1799位點(diǎn)突變，由C→G，占54.4%(19/35)，為無義突變；nt1752位點(diǎn)突變，由A→G，使該密碼由異亮氨酸變?yōu)槔i氨酸，占37.1%(13/35）；nt1753T→C，占20.0%(7/35)。
核心抗原與e抗原有部份相同的序列，這部份序列可被宿主細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞識別，核心多肽的改變可經(jīng)免疫攻擊導(dǎo)致慢性肝疾病。研究結(jié)果顯示每份標(biāo)本在Enh2/CP區(qū)均有鹼基突變，最常見的突變是nt1762、1764發(fā)生雙突(A→T、G→A)，次常見的突變有nt1799位點(diǎn)突變，由C→G，為無義突變；nt1752位點(diǎn)突變，由A→G，使該密碼由異亮氨酸變?yōu)槔i氨酸，nt1753T→C。核心基因啟動子突變使乙型肝炎病毒（HBV）能夠在體內(nèi)持續(xù)感染，這些突變與慢性活動性肝炎有關(guān)。
