乙肝的治療性疫苗
近年來(lái)，基因重組技術(shù)及免疫學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展使得利用疫苗來(lái)治療慢性ＨＢＶ感染成為研究的熱點(diǎn)。目前認(rèn)為，病毒清除是由于ＣＴＬ介導(dǎo)的ＨＢＶ感染的肝細(xì)胞溶解和（或）ＣＴＬ產(chǎn)生的細(xì)胞因子（如ＩＦＮγ等）的抗病毒效應(yīng)，而多克隆、多特異性、應(yīng)答強(qiáng)及ＩＦＮγ分泌能力強(qiáng)的ＣＴＬ尤為重要。利用疫苗治療慢性ＨＢＶ感染的作用機(jī)制是通過(guò)對(duì)抗原的改造和（或）抗原遞呈途徑的改變，使得Ｔ細(xì)胞更易識(shí)別抗原，促使前體Ｔ細(xì)胞增殖分化成效應(yīng)Ｔ細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)。
①聯(lián)合使用或優(yōu)化現(xiàn)有疫苗ａ重組ＨＢｓＡｇ疫苗：該類疫苗在預(yù)防ＨＢＶ感染方面取得了肯定的效果。目前臨床上對(duì)一些單用干擾素治療無(wú)效者用重組ＨＢｓＡｇ疫苗聯(lián)合干
擾素治療，ＨＢｅＡｇ陰轉(zhuǎn)率39％（7／18），ＨＢＶＤＮＡ陰轉(zhuǎn)率50％（9／18），ＡＬＴ56％（10／18）轉(zhuǎn)為正常；聯(lián)合拉米夫定加用或不加用白細(xì)胞介素2等治療，ＨＢＶＤＮＡ陰轉(zhuǎn)率分別為7／9和2／5。ｂ含ｐｒｅＳ，和Ｓ抗原的疫苗：研究表明使用此類疫苗免疫治療后能不同程度打破免疫耐受，降低血清中病毒含量，為干擾素或其他治療創(chuàng)造良機(jī)，提高療效。研究表明使用疫苗免疫治療后能不同程度打破免疫耐受，降低血清中病毒含量，為干擾素或其他治療創(chuàng)造良機(jī)，提高療效。ｃ免疫復(fù)合物性（ＩＣ）疫苗：聞?dòng)衩吩菏康扔弥亟MＨＢｓＡｇ與鼠抗ＨＢｓ組建的免疫復(fù)合物免疫小鼠后發(fā)現(xiàn)，ＩＣ免疫鼠脾細(xì)胞較單獨(dú)
ＨＢｓＡｇ免疫鼠脾細(xì)胞可誘生更多的Ｔｈ1型細(xì)胞因子，經(jīng)證實(shí)這種免疫增強(qiáng)作用與通過(guò)抗體Ｆｃ段促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞攝取免疫復(fù)合物有關(guān)。應(yīng)用重組的含免疫復(fù)合物基因的ＤＮＡ疫苗與重組
?。龋拢螅粒纭?fù)合物疫苗、含Ｓ基因的質(zhì)粒ＤＮＡ分別免疫轉(zhuǎn)基因鼠后，結(jié)果表明以含復(fù)合物基因的ＤＮＡ疫苗組血清 ＨＢｓＡｇ下降最明顯，抗
?。龋拢蟮味取⑵⒓?xì)胞ＩＮＦγ分泌均最高，同時(shí)ＣＴＬ反應(yīng)和肝細(xì)胞
?。龋拢螅粒绫磉_(dá)下降最明顯。以上研究表明ＩＣ疫苗有一定的應(yīng)用前景。ｄ多肽疫苗：清除病毒的Ｔ細(xì)胞表位和佐劑（脂質(zhì)分子）等聯(lián)合后制成疫苗用于治療。由于表位的識(shí)別需借助于ＭＨＣ分子，后者具有高度的多態(tài)性，所以難于合成針對(duì)所有病人都有效的表位疫苗，也限制了表位疫苗的研究和應(yīng)用。有人使用一種由兩分子棕櫚酸、破傷風(fēng)毒素第830～843位氨基酸和核心抗原18～27位氨基酸組成的疫苗，在小鼠試驗(yàn)中可誘生特異ＣＴＬ，健康志愿者注射該疫苗500μｇ可誘生對(duì)
?。龋拢悖粒缣禺惖模茫裕谭磻?yīng)。此類疫苗的研究在于應(yīng)用高效的Ｔｈ表位和佐劑來(lái)提高疫苗的免疫原性。
?、冢模危烈呙纾航陙?lái)，應(yīng)用ＤＮＡ疫苗預(yù)防和治療ＨＢＶ感染已有較多報(bào)道。通常選擇能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫的基因構(gòu)建ＤＮＡ疫苗，可以是單個(gè)基因、完整的一組基因、編碼抗原決定簇的一段或數(shù)段核苷酸序列等。并且ＤＮＡ疫苗的機(jī)制研究獲得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，ＤＮＡ疫苗對(duì)清楚病毒感染細(xì)胞發(fā)揮重要功能的免疫有著明顯的促進(jìn)作用，使得該疫苗不僅是在預(yù)防而且在治療上也有一定的意義。核酸疫苗不僅有預(yù)防ＨＢＶ感染的作用，而且具有治療慢性ＨＢＶ感染的潛力，有研究小組報(bào)道核酸疫苗在慢性ＨＢＶ?jǐn)y帶者能誘導(dǎo)特異性的Ｔ細(xì)胞反應(yīng)，但維持的時(shí)間仍不夠理想。法國(guó)最早在人體進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，尚且需要更多的實(shí)驗(yàn)和認(rèn)識(shí)。
在ＤＮＡ疫苗的基礎(chǔ)上，又發(fā)展出共表達(dá)核酸疫苗，將一些刺激免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子和 ＨＢＶ病毒抗原在一個(gè)載體中表達(dá)來(lái)達(dá)到比較好的免疫反應(yīng)。
由于模擬了病毒的自然感染過(guò)程，乙肝ＤＮＡ疫苗不僅能引起宿主的體液免疫，還能產(chǎn)生細(xì)胞免疫。ＤＮＡ質(zhì)粒在注射部位被肌細(xì)胞攝取后，通過(guò)所含的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子系統(tǒng)調(diào)節(jié)合成的所編碼的蛋白質(zhì)。被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶復(fù)合體降解成含病毒表面抗原的肽段，進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與合成的
ＭＨＣＩ類分子結(jié)合，然后被轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)遞呈到細(xì)胞膜表面。此復(fù)合體共同激活ＣＤ8＋ＣＴＬ；部分被分泌或釋放人血的蛋白質(zhì)，激活特異性Ｂ細(xì)胞，從而產(chǎn)生保護(hù)性抗體。根據(jù)小鼠和黑猩猩ＤＮＡ疫苗實(shí)驗(yàn)結(jié)果，ＤＮＡ疫苗的免疫效果優(yōu)于
?。龋拢螅粒绲鞍?，尤其對(duì)無(wú)反應(yīng)、低反應(yīng)人群應(yīng)用及阻止垂直傳播的優(yōu)勢(shì)更加明顯。ＤＮＡ疫苗的免疫保護(hù)作用已得到公認(rèn)，但要在臨床上廣泛應(yīng)用，還有很長(zhǎng)的路要走。
?。模危烈呙绲陌踩允谴蠹姨貏e關(guān)注的問(wèn)題，ａ質(zhì)粒ＤＮＡ與宿主基因組的整合；ｂ生物體對(duì)ＤＮＡ疫苗的免疫耐受；ｃ核酸疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)有可能誘發(fā)或加重自身免疫性疾病的發(fā)生等。但隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)等相關(guān)科學(xué)的發(fā)展，相信在不久，作為第三代乙肝疫苗的ＤＮＡ乙肝疫苗在經(jīng)過(guò)不斷改善提高后將為人類根除乙肝起到巨大作用。
?、蹣?shù)突狀細(xì)胞疫苗：ＤＣ作為專職的抗原遞呈細(xì)胞，能攝取、加工、及遞呈抗原，并在缺乏其他任何刺激因子的條件下啟動(dòng)機(jī)體的免疫應(yīng)答。
近年來(lái)，研究者通過(guò)多種方式直接或間接恢復(fù)和增強(qiáng)乙型肝炎病人 ＤＣ 的抗原提呈功能，包括：ａ
細(xì)胞因子（ＩＬ12、ＩＦＮγ、ＩＦＮα等）體內(nèi)外的作用；ｂＨＢｓＡｇ疫苗體內(nèi)刺激；ｃ優(yōu)化的增強(qiáng)ＤＣ攝取功能的ＤＮＡ疫苗；ｄＤＣ體外誘導(dǎo)和抗原沖擊或基因修飾后回輸（ＤＣ疫苗）。
含有佐劑的 ＨＢｓＡｇ疫苗治療
ＨＢＶ轉(zhuǎn)基因（Ｔｇ）鼠，每月注射1次，連續(xù)12個(gè)月，對(duì)照組只用佐劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5～6個(gè)月后血清ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ滴度開(kāi)始下降，12個(gè)月后，60％～80％實(shí)驗(yàn)鼠轉(zhuǎn)陰，ＨＢＶＤＮＡ也減少，表明該疫苗能夠有效打破ＨＢＶ耐受。但是，治療前血清
?。龋拢螅粒?、ＨＢｅＡｇ和ＤＮＡ滴度均相同Ｔｇ鼠中部分卻沒(méi)有對(duì)疫苗發(fā)生反應(yīng)。進(jìn)一步研究證實(shí)，Ｔｇ鼠的ＤＣ非常異質(zhì)，其中ＤＣ功能相對(duì)較好者對(duì)疫苗治療有反應(yīng)，而較差者則無(wú)反應(yīng)。因此，誘導(dǎo)ＤＣ活化是疫苗治療作用的關(guān)鍵，治療前Ｔｇ鼠ＤＣ的功能對(duì)疫苗治療結(jié)果有較大的影響。
進(jìn)一步的研究對(duì)其他 ＨＢＶ抗原進(jìn)行了類似的研究，亦在Ｔｇ鼠觀察到抗病毒的效應(yīng)，該治療方法也是未來(lái)有希望打破免疫耐受、控制病毒復(fù)制的治療手段。
看一下乙肝防治的幾個(gè)有里程碑意義的事件：
1963年，發(fā)現(xiàn)了澳大利亞抗原，后改稱乙肝病毒表面抗原，就是我們俗稱的“澳抗”。1970年，電子顯微鏡下發(fā)現(xiàn)血樣中的乙肝病毒顆粒。1974年，乙肝病毒分子結(jié)構(gòu)明確。1975年，乙肝病毒免疫球蛋白研制成功，用于乙肝病毒被動(dòng)免疫。1976年，α干擾素首次用于治療慢性乙肝。1981年，血清乙肝病毒亞單位制成的疫苗研制成功，廣泛使用。1986年，從酵母菌中制備出乙肝病毒亞單位疫苗，并通過(guò)使用。1999年，首個(gè)用于抗乙肝的核苷類似物——拉米夫定上市。2003年，長(zhǎng)效干擾素——聚乙二醇化干擾素α2ａ在我國(guó)上市。2005年，阿德福韋酯在我國(guó)上市。2006年，恩替卡韋在我國(guó)上市，用于治療慢性乙肝。2007年4月，替比夫定（素比伏）獲準(zhǔn)在中國(guó)用于治療慢性乙型肝炎。
看到這些成就，我們相信，在不久的將來(lái)，攻克乙肝不再是一個(gè)夢(mèng)。
